ПЦР — что это такое?

С середины 90-х гг. в практической медицине стал широко применяться но­вый диагностический подход, основанный на применении метода ПЦР (полимеразная цепная реакция).

На данный момент в России и странах СНГ активно функционируют более 1000 лабораторий, применяющих на практике метод ПЦР. За этот период метод ПЦР как один из методов клинической лабораторной диагностики прошел несколь­ко этапов развития, в том числе несколько этапов становления и утверждения в практическом здравоохранении.

Некоторое время тому назад, среди медицинской общественности было широко распространено несколько эйфорическое отношение к ПЦР-методу, как к некоей панацее, «самому-самому» методу диагностики, способному решить сра­зу много вопросов и применимому во всех областях.

Через определенное время стало понятно, что ПЦР – всего лишь один из методов лабораторной диагностики, но даже новый замечательный метод, име­ющий много преимуществ, не может решить всех проблем, и кроме того, имеет ряд существенных ограничений. Помимо всего, как грибы стали возникать фирмы и лаборатории, выпускающие наборы реагентов для ПЦР, зачастую не отвечаю­щие требованиям по качеству, а широкомасштабная неумелая реклама только усилила эффект последующего разочарования. Эти обстоятельства привели к тому, что в некоторых кругах региональной медицинской общественности метод ПЦР (а точнее его первоначальное практическое воплощение) до сих пор ассо­циируется с какой-то разновидностью шарлатанства.

Однако, к настоящему моменту метод ПЦР:

-занял прочную позицию в ряду диагностических методик;

-получил официальное признание в виде утвержденной номенклатуры кли­нических лабораторных исследований;

-претерпел существенные изменения в области оптимизации проведения анализа, усовершенствования аппаратурного оборудования, повышения качества и надежности выпускаемых тест-систем.

Методы  выявления  ДНК  и  РНК-возбудителей  в  настоящее  время  применяют  в  основном  для  диагностики  вирусных инфекций. Методы генной диагностики базируются на выявлении нуклеотидных последовательностей непосредственно в патологическом материале с помощью молекулярных зондов — искусственно полученных нуклеиновых кислот, комплементарных вирусным нуклеиновым кислотам и меченных биотином или радиоактивной меткой. 

Особенность метода ПЦР — многократное копирование (амплификация, репликация, удвоение) с помощью фермента ДНК-полимеразы определённого фрагмента ДНК, состоящего из нескольких десятков или сотен нуклеотидных пар, который уникален, то есть специфичен для  данного вида возбудителя. Механизм репликации таков, что достраивание фрагмента  может начаться только в определённых стартовых блоках, для создания которых в заданных участках ДНК используют затравки (праймеры) — специально синтезированные олигонуклеотиды. Праймеры  комплементарны последовательностям в пределах границ специфического  фрагмента, и синтез ДНК протекает только в этих границах. Специфичность метода определяется выбором определяемого фрагмента (как правило, выбирается наиболее консервативный участок генома возбудите­ля, не подверженный мутациям) и подбором олигонуклеотидных затравок (праймеров) к границам искомого фрагмента. Специфичность декларируется произ­водителем тест-системы как одна из важнейших характеристик.

Процесс ПЦР заключается в большом числе циклов синтеза (амплификации) специфического фрагмента ДНК, накоплении большого  числа  копий,  которые  затем  могут  быть  выявлены  обычными  методами  детекции  (иммунофлюоресцентный  анализ, электрофорез).

Преимущества ПЦРдиагностики: 

●простота исполнения;

●возможность полной автоматизации;

●быстрота получения результата;

●малое количество патологического материала, необходимого для исследования;

●возможность диагностики острых, хронических, латентных инфекций;

●выявление некультивируемых, персистирующих форм патогенов.

По  чувствительности  ПЦР  наиболее  совершенен  как  диагностический  метод  (на  несколько порядков выше, чем другие тесты). Специфичность метода также высока, но пока большинство тест-систем недостаточно надёжны, чтобы вытеснить классические методики при диагностике даже абсолютных патогенов.

Что  касается  оппортунистических  инфекций, то значение молекулярно-генетических методов диагностики пока нельзя признать сколько-нибудь значимыми, так как определяющим моментом в развитии таких воспалительных процессов служит количественный фактор, а не само по себе присутствие микроорганизма в обследуемом локусе.

В настоящее время ПЦР-методы широко используют в диагностике вирусных, паразитарных и бактериальных ИППП, чаще в  качестве  первичного  скрининга, а также контроля излеченности в сочетании с  другими методами лабораторной диагностики.

Каково же на современном этапе положение метода ПЦР в ряду лабора­торных диагностических методик:

Задачей метода ПЦР является выявление специфического участка ДНК или РНК путем получения большого количества копий данного участка, которые мож­но определить доступными лабораторными методиками. Несмотря на достаточно широкий круг возможного использования (диагностика наследственных заболе­ваний, идентификация личности, определение комплексов гистосовместимости тканей и др.), в основном метод ПЦР нашел применение для выявления возбуди­телей инфекционных заболеваний.

Такое широкое применение именно для диагностики инфекций обусловле­но:

1.    простотой и универсальностью метода;

2.    возможностью определения возбудителя с очень высокой специфичностью (до 100%), т.е способностью выявлять ДНК только искомого микроорганизма в клиническом образце, содержащем большую нагрузку по человеческой ДНК, ДНК других возбудителей, белкам и пр.

3. высокой чувствительностью, которая обеспечивает возможность выяв­ления единичных клеток или частиц возбудителя.

На эту тему Вы также можете почитать

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *